Análisis de determinación de aminoácidos, compuestos fenólicos y azúcares realizados a 21 especies de plantas útiles de los mercados de Barranquilla

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Instituto de Investigación de Recursos Biológicos Alexander von Humboldt (2022). Resultado de los análisis de determinación de aminoácidos, compuestos fenólicos y azúcares realizados a 21 especies de plantas útiles de los mercados de Barranquilla. http://i2d.humboldt.org.co/ceiba/resource.do?r=plantas-utiles_fq-uis_2022

Palabras clave

aminoácidos; azúcares; compuestos fenólicos; análisis fisicoquímicos; plantas útiles; material vegetal; gc/fid; uhplc-esi+-orbitrap-ms; uhplc-obitrap-ms; Other

Contactos

Cobertura geográfica

Toma de muestras de especies de plantas útiles en la ciudad de Barranquilla (Atlántico, Colombia).

Cobertura taxonómica

Análisis fisicoquímicos de 21 especies de plantas útiles de los mercados públicos del centro de la ciudad de Barranquilla.

Cobertura temporal

Datos del proyecto

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Personas asociadas al proyecto:

Métodos de muestreo

Se colectaron diferentes estructuras de las especies que eran de interés. Éstas podrían ser hojas, frutos, tallos o cortezas, dependiendo de los análisis que se les fuera a realizar y el objetivo planteado para cada una. Se aseguró que estuvieran las cantidades mínimas requeridas que en este caso correspondía a 100 g de material fresco o 10 g de material seco por análisis; es decir que, si a una misma estructura se le hacían 2 análisis diferentes, la cantidad correspondía a 200 g de material fresco o 20 g de material seco. Cabe mencionar que los pesos no fueron exactos y más bien se buscó sobrepasar el mínimo requerido porque en los mercados de Barranquilla no se contaba con las condiciones para asegurar la exactitud en las cantidades que debían ser enviadas a los laboratorios. De cada una de las especies, se envió una muestra con las condiciones antes especificadas y se empacaron en bolsas Ziploc marcadas. Adicionalmente, las hojas y cortezas se empacaron previamente en bolsas de papel. Posteriormente, los materiales más perecederos fueron introducidos en cavas de icopor que contenían geles para refrigerar y asegurar la cadena de frío hasta el sitio de análisis. Las demás especies que no requerían este procedimiento fueron empacadas en cajas de cartón.

Descripción de la metodología paso a paso:

1. Análisis de polifenóles La preparación de la muestra se realizó por medio de un procedimiento interno del laboratorio. Como estándares de referencia se utilizaron las xantinas: cafeína (Part N° C8960-250G, Sigma-Aldrich), teobromina (Part N° T4500-25G, Sigma-Aldrich) y teofilina (Part N° T1633-25G, Sigma-Aldrich); las catequinas: (±)-catequina (C) (Part N° C1788-500MG, Sigma-Aldrich), (-)-epigalocateqina galato (EGCG) (Part N° E4143-50MG, Sigma-Aldrich), (-)-epicateqina (EC) (Part N° E1753-1G, Sigma-Aldrich), (-)-epicateqina galato (ECG) (Part N° E3893-10MG, Sigma-Aldrich), (-)-epigalocateqina (EGC) (Part N° E3768-5MG, Sigma-Aldrich); los flavonoides: ácido caféico (Part N° C0625, Sigma-Aldrich), ácido p-cumárico (Part N° C9008, Sigma-Aldrich), ácido rosmarínico (Part N° 536954-5G, Sigma-Aldrich), quercetina (Part N° Q4951-10G, Sigma-Aldrich), naringenina (Part N° N5893-1G, Sigma-Aldrich), luteolina (Part N° L9283-10MG, Sigma-Aldrich), kaempferol (Part N° K0133-50MG, Sigma-Aldrich), pinocembrina (Part N° P5239, Sigma-Aldrich), apigenina (Part N° A3145-25MG, Sigma-Aldrich); las antocianinas: cianidina 3-rutinosido (Part N° G36428, Sigma-Aldrich), pelargonidina 3-glucósido (Part N° 53489, Sigma-Aldrich), quercetina 3-glucósido (Part N° 89230, Phytolab). Los análisis se realizaron en un cromatógrafo líquido de ultra-alta eficiencia (UHPLC), Dionex Ultimate 3000 (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.), equipado con una bomba binaria de gradiente (HP G3400RS), un inyector automático de muestras (WPS 300TRS) y una unidad termostada para la columna (TCC 3000). La interfaz del LC-MS fue la electronebulización (ESI) y el espectrómetro de masas fue de alta resolución con un sistema de detección de corrientes de iones Obitrap. Operado en modo positivo con un voltaje de capilar de 4,5 kV. Con una columna Hypersil GOLD Aq (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.; 100 x 2.1 mm, 1.9 µm de tamaño de partícula) a 30 °C. La fase móvil fue A: una solución acuosa de 0,2% de formiato de amonio y B: acetonitrilo con 0,2% de formiato de amonio. La condición inicial de gradiente fue de 100% A, cambiando linealmente hasta 100% B (8 min); se mantuvo durante 4 min; el retornó a las condiciones iniciales en 1 min; el tiempo total de corrida fue de 13 min, con 3 min para post-corrida. La identificación de los compuestos se realizó usando el modo de adquisición full scan y la extracción de corrientes iónicas (EIC) correspondientes a los [M+H]+ de compuestos de interés, medición de masas con exactitud y precisión de Δppm < 1 y usando una solución-mix estándar de los compuestos (sustancias certificadas estándar), para la cuantificación de los analitos de interés se realizaron curvas de calibración empleando los materiales de referencia certificados.
2. Análisis de azúcares El análisis de las muestras se desarrolló según el artículo “Comparison of MTBSTFA and BSTFA in derivatization reactions of polar compounds prior to GC/MS analysis. Talanta, Volume 77, Issue 4, 15 February 2009, Pages 1473-1482. Se emplearon como estándares de referencia de: fructosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), galactosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), glucosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), maltosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.0%), manitol (Dr. Ehrenstorfer, 99.0%), sacarosa (Dr. Ehrenstorfer, 99.5%), sorbitol (Dr. Ehrenstorfer, 98.6%) y xilitol (Dr. Ehrenstorfer, 99.8%). El análisis de la(s) muestra(s) se realizó en cromatógrafo de gases (GC) AT 6890N (Agilent Technologies, Palo Alto, California, EE.UU.), con detector de ionización de llama (FID). La columna empleada en el análisis fue HP-Ultra 2 (J & W Scientific, Folsom, CA, EE.UU.) de 5%-Ph-PDMS, 25 m x 0,20 mm x 0,33 µm.
3. Análisis de aminoácidos La preparación de la muestra se llevó a cabo empleado un procedimiento interno del laboratorio. Como estándares de referencia se utilizaron: asparagina (AccuStandard, 99%), ácido glutámico (AccuStandard, 99%), ácido aspártico (AccuStandard, 98% ) y glutamina (AccuStandard, 98%). Los análisis se realizaron en un cromatógrafo líquido de ultra-alta eficiencia (UHPLC), Dionex Ultimate 3000 (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.), equipado con una bomba binaria de gradiente (HP G3400RS), un inyector automático de muestras (WPS 300TRS) y una unidad termostada para la columna (TCC 3000). La interfaz del LC-MS fue la electronebulización (ESI) y el espectrómetro de masas fue de alta resolución con un sistema de detección de corrientes de iones Obitrap. Operado en modo positivo con un voltaje de capilar de 4,5 kV. Se empleó un columna Hypersil GOLD Aq (Thermo Scientific, Sunnyvale, CA, EE.UU.; 100 x 2.1 mm, 1.9 µm de tamaño de partícula) a 30 °C. La fase móvil fue A: una solución acuosa de 0,2% de formiato de amonio y B: acetonitrilo con 0,2% de formiato de amonio. La condición inicial de gradiente fue de 100% A, cambiando linealmente hasta 100% B (8 min); se mantuvo durante 4 min; el retornó a las condiciones iniciales en 1 min; el tiempo total de corrida fue de 13 min, con 3 min para post-corrida. La identificación de los compuestos se realizó usando el modo de adquisición full scan y la extracción de corrientes iónicas (EIC) correspondientes a los [M+H]+ de compuestos de interés, medición de masas con exactitud y precisión de Δppm < 1 y usando una solución-mix estándar de los compuestos (sustancias certificadas estándar), para la cuantificación de los analitos de interés se realizaron curvas de calibración empleando los materiales de referencia certificados.

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